纯化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯质粒DNA和非基因组DNA

Features

高效去除基因组DNA污染

转染级别纯度的高分子量DNA

快速简单的操作

Product Details

QIAGEN Large-Construct Kit提供重力流和阴离子交换柱，用于纯化大分子量的DNA。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤，确保特异性去除基因组DNA。产物DNA的纯度相当于经过两次CsCl密度梯度离心得到的纯度，适用于转染级别的应用。

Performance

使用QIAGEN Large-Construct Kit纯化DNA，无基因组DNA的污染。基因组DNA的去除确保准确可靠的进行DNA定量，使一些敏感实验可在明确的和可重复的条件下进行。

Principle

QIAGEN Large-Construct Kit使用经优化的重力流操作，获得的DNA的纯度显著高于其他常规方法获得的DNA的纯度。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤，确保特异性去除基因组DNA。

QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化设计。其出色的核酸分离特性可纯化得到高纯度DNA，相当于经过两次氯化铯梯度离心得到的纯度。预装的QIAGEN-tips运用重力沉降原理，减少了质粒制备过程所需的手工操作时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用苯酚、氯仿、溴乙锭和氯化铯等有毒物质，最大程度减小了对使用者及环境的危害。

Procedure

使用碱裂解法裂解多达500 ml的培养液后，使用试剂盒中的ATP-dependent外切酶进行消化，确保特异性去除基因组DNA及缺损的高分子量DNA。之后将样本上样至阴离子交换柱，在适当的低盐浓度和pH值条件下，质粒DNA与树脂特异性结合。用中等盐浓度的缓冲液洗涤，去除RNA、蛋白质、代谢物和其他小分子的杂质。用高盐缓冲液洗脱已去除基因组DNA的纯化质粒DNA。加入异丙醇使DNA浓缩和脱盐，之后离心收集。

Applications

QIAGEN Large-Construct Kit纯化获得的DNA适用于各种下游应用，包括：

亚克隆和鸟枪法制备DNA文库

对高分子量DNA直接进行测序

转染

Supporting data and figures

QIAGEN Plasmid Kit procedures.

Neutralized bacterial lysates are cleared by centrifugation. The cleared lysate is then loaded onto the anion-exchange tip where plasmid DNA selectively binds under appropriate low-salt and pH conditions. RNA, proteins, metabolites, and other low-molecular-weight impurities are removed by a medium-salt wash, and ultrapure plasmid DNA is eluted in high-salt buffer. The DNA is concentrated and desalted by isopropanol precipitation and collected by centrifugation.

Specifications

Features                                        Specifications

Plasmid type                                BAC, PAC, P1, cosmid DNA

Applications                                Subcloning, transfection, sequencing etc.

Processing                                Manual (centrifugation)

Culture volume/starting material<500 ml culture volume

Samples per run (throughput)1 sample per run

Technology                                     Anion-exchange technology

Time per run or prep per run        280 min

Yield                                        <150 ug