在E. coli、哺乳动物细胞和昆虫细胞中平行表达His-Strep-tagged蛋白

Features

单个载体在三个体系中平行表达

无需进行费时的亚克隆步骤

高水平表达

严谨的表达调控

提高了毒性蛋白表达的稳定性

Product Details

His-Strep pQE-TriSystem Vector Set中的载体含有E. coli、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统的启动子。His-Strep pQE-TriSystem载体含有一个6xHis和一个Strep标签，可在Ni-NTA和Strep-Tactin基质上进行连续纯化，获得超纯（纯度>98%）蛋白。载体C端都含有一个标签，确保纯化全长蛋白。

Performance

His-Strep pQE-TriSystem Vector Set表达的双标签蛋白可通过两步亲和纯化进行分离，获得超纯（纯度>98%）蛋白。

Principle

His-Strep pQE-TriSystem Vector Set可表达同时带有一个6xHis和一个Strep-tag II标签的蛋白。双标签蛋白经两步亲和纯化系统纯化，通过标准化流程简单、高效纯化超纯蛋白。此系统无需研发和优化蛋白特异性操作流程，可提高通量。带有两种标签的重组蛋白可在Ni-NTA和Strep-Tactin基质上进行连续纯化。两个简单的亲和纯化步骤可获得完全有活性、全长、超纯的蛋白，适用于多种下游应用。

Procedure

使用pQE-TriSystem His-Strep载体在E. coli、昆虫细胞或哺乳动物细胞中可有效表达带有两个小亲和标签（6xHis和Strep-tag II标签）的重组蛋白。细胞裂解并澄清裂解液后，首先通过固定化金属亲和层析（IMAC）操作流程纯化蛋白，此流程基于经验证的6xHis-tag-Ni-NTA相互作用。使用咪唑从Ni-NTA基质洗脱后，重组蛋白（也带有Strep-tag II标签）直接加入到Strep-Tactin基质中。无需改变缓冲液。使用生物素或脱硫生物素可从Strep-Tactin基质中洗脱蛋白。使用Strep-tag或Anti·His的小鼠单抗可高特异性和灵敏度地检测蛋白。

Applications

Two-Step Affinity Purification System非常适合需要高纯度但单独的His标签纯化难以达到的应用，如真核细胞的蛋白表达。Two-Step Affinity Purification System具有的超高纯度和便利性使其适用于：

高纯度蛋白纯化

结构和功能分析

真核系统表达